在我們進行蛋白表達時,常常會加入一些肽類和蛋白,使得其與目的蛋白融合表達,以便于我們進行進一步的檢測、跟蹤和純化。這類肽類和蛋白,我們稱之為標簽蛋白(也叫蛋白標簽)。一般來說,蛋白標簽對蛋白本身并不會起到太大的作用,但是能夠為我們蛋白表達的過程提供相關佐證。
蛋白標簽的具體作用:
1、識別。通過給蛋白添加一些易于識別的標簽,以達到快速鑒定目的蛋白的目的;
2、跟蹤。通過定位標簽確定蛋白在細胞中的位置,進而了解其生理功能和信號通路等;
3、定量。通過標簽來確定蛋白的量;
4、純化。通過識別標簽來對蛋白進行相關純化工作;
常見的標簽蛋白及其特點:
1、his標簽。其特點是分子量小,不會影響到蛋白的理化性質,免疫原性低,主要用于蛋白純化;
2、FLAG標簽。其特點是分子量小,不會改變融合蛋白功能,含有一個腸激酶切割位點,以便于標簽的去除。主要用于免疫沉淀、免疫熒光以及ELISA制備;
3、GST標簽。特點是可用于增加外源蛋白可溶性,在大腸桿菌中科實現(xiàn)大量表達,特異性高,純化方便;可用于蛋白純化、酶學分析以及免疫分析;
4、c-Myc標簽。特點是以人Myc基因的一部分而盡量避免人源細胞的相關實驗。主要用于WB、免疫沉淀、免疫熒光以及流式細胞術等;
5、HA標簽。特點是對外源蛋白空間結構影響小,容易構成標簽蛋白。主要用于蛋白純化、ELISA以及免疫沉淀等;
當然了,雖然說很多標簽都適用于蛋白純化等操作,但是也要結合實際情況來進行選擇,這樣不僅能提升蛋白制備的成功率,也能在更大程度上滿足標簽蛋白的需求,當然了,制備成本也能得到很好的控制。武漢蒲建設橫五專業(yè)為廣大用戶提供蛋白制備服務,如果您有香瓜需求,歡迎來電咨詢。