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蛋白提取分離過程中的細胞破碎的詳細步驟

發(fā)表時間:2022-10-17 訪問次數:3145

  當我們需要進行細胞內部蛋白提取需求時,我們就需要對蛋白進行破碎操作(有關細胞提取和分離的過程可以在“蛋白純化之前常用的一些提取和分離方法簡介”一問查看)。那么,細胞破碎具體有哪些方法呢?下面普健生物就和大家一一介紹。

  對于細胞破碎的方法,我們需要提前考慮破碎的目的和獨享類型。細胞的類型、大小、形態(tài)、生長條件、細胞壁結構以及溫度換、PH值等都需要考慮到,綜合這些特性,才能找出最合適的方法。因為在破碎的過程中會產生熱量,需要提前準備好冷卻樣品。而且細胞一旦破碎,就會失去代謝調節(jié)機制的控制,目的蛋白可能會受到蛋白酶的影響。這個時候我們就需要迅速提取出來,或者加入抑制劑,或通過低溫來降低蛋白酶的作用。

  如下,就是普健生物為大家總結的幾種常用的細胞破碎方法及其優(yōu)缺點。

  1、超聲波法。通過強烈的超聲波迅速造成大量細胞破裂,破裂效果非常好,而且所需的樣品數量少,使用最為廣泛,但是不適合用來進行大規(guī)模的細胞破裂,而且對溫度控制要求較高;

  2、高速珠磨法。采用高速珠磨碎細胞,可以快速有效地破裂細胞,但是破碎的條件相對難以掌握;

  3、高壓勻漿法。通過驟然改變細胞的碰撞、壓力等方式,來實現細胞的被動破裂,可以用于大規(guī)模的操作,使用非常的廣泛,但是對于那些與細胞膜結合的蛋白來說,需要進行多次破碎才能實現;

  4、凍融法。將細胞置于-15度的環(huán)境下冷凍,然后再在室溫下解凍,通過解凍的過程破碎細胞。這個方法只適合那些細胞壁脆弱的類型,破碎率較低,而且容易造成蛋白失活(通常需要大量的時間);

  5、酶解法。通過合適的酶來控制細胞的破裂,需要相對溫和的條件,而且專一性強,無法實現工業(yè)化生產;

  如上就是普健生物為大家總結的有關細胞破裂的幾種操作方法,這些方法都能在一定程度上對細胞進行破裂。但是很多方法只適合實驗室使用,無法實現大規(guī)模工業(yè)化的生產。不過,相信在不久的未來,更多更優(yōu)質的方法將會被發(fā)明出來。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供蛋白純化服務,如果您有相關需求,歡迎來電咨詢。